Atti del 52° Congresso Nazionale: Società Italiana di Igiene, Medicina Preventiva e Sanità Pubblica (SItI)

Abbiamo utilizzato due metodiche, una tradizionale microbiologica ed una molecolare. Sono stati scelti per la ricerca di Listeria monocytogenes 10 campioni di salmone affumicato e 10 di gorgonzola, e sono stati inquinati con un ceppo puro ATCC7644 (Biolife). In parallelo è stata condotta l'analisi degli stessi campioni non inquinati. Per l'analisi microbiologica è stata seguita la norma EN/ISO 11290-1:2017; la positività a Listeria monocytogenes è evidenziata dalla pigmentazione azzurra delle colonie su terreno ALOA (Agar Listeria Ottaviani & Agosti). Le colonie tipiche dei campioni in esame sono state sottoposte a prova biochimica tramite sistema d'identificazione API Listeria (BioMérieux). L'analisi molecolare è stata effettuata mediante MLST (Multi Locus Sequence Typing) che prevede l'identificazione con PCR di 7 geni housekeeping: abcZ, bgIA, cat, dapE, dat, ldh e IhkA che caratterizzano in maniera specifica i diversi types di Listeria monocytogenes. I geni amplificati sono stati purificati e sottoposti a sequenziamento mediante Sequenziatore Capillare ABIPRISM 3500, e le sequenze ottenute analizzate mediante "Listeria MLST database" presso il Pasteur Institute. L'analisi di PCR è stata effettuata direttamente sui campioni da analizzare senza estrazione di DNA genomico. L'alimento è stato mescolato con 1 ml di soluzione Fraser Broth Half Concentration e dopo 48 ore d'incubazione a 37°C sono state prelevate delle aliquote da utilizzare come stampo per la PCR. Il ceppo di Listeria monocytogenes ATCC è stato utilizzato come controllo negli esperimenti molecolari.